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技術(shù)文章 / article
剛收到的細(xì)胞株如何進(jìn)行合理的處理？
原載自：www.niangtai.cn[技術(shù)資料頻道] 2022-11-09 瀏覽次數(shù)：1028
當(dāng)我們剛收到細(xì)胞株購買的包裹時，請檢查細(xì)胞株冷凍管是否有解凍情形，若有請立即告知供貨商。細(xì)胞株請盡速開始培養(yǎng)，或立即冷凍保存(置于-70℃，隔夜后，移到liq N2)。
冷凍細(xì)胞解凍程序如下：
1.依據(jù)細(xì)胞株數(shù)據(jù)單規(guī)定之基礎(chǔ)培養(yǎng)基種類、血清種類和其它規(guī)定之成份和比例，制備培養(yǎng)基。絕大多數(shù)之細(xì)胞均無法立即適應(yīng)不同之基礎(chǔ)培養(yǎng)基或不同之血清種類，若因?qū)嶒炐枰?，必須有所不同時，務(wù)必以緩慢比例漸次改變培養(yǎng)基組成，確定細(xì)胞適應(yīng)后，方進(jìn)行所需之實驗。
2.FBS(胚牛血清)，CS(小牛血清)和HS(馬血清)對細(xì)胞而言差異極大，請務(wù)必依據(jù)細(xì)胞株資料單規(guī)定之血清種類培養(yǎng)之。
3.將培養(yǎng)基置于37℃水槽中回溫，回溫后噴以70%酒精并擦拭之，移入無菌操作臺內(nèi)。取出冷凍管，立即放入37℃水槽中快速解凍，水面高度不可接近或高過冷凍管之蓋沿，否則易發(fā)生污染。輕搖冷凍管使其在1分鐘內(nèi)全部融化后，以70%ethanol擦拭冷凍管外部，移入無菌操作臺內(nèi)。
4.依據(jù)細(xì)胞種類和濃度，于無菌操作臺內(nèi)取10 ml培養(yǎng)基加至T25或T75 flask中。取出已解凍之細(xì)胞懸浮液，緩緩加入T25或T75 flask內(nèi)之培養(yǎng)基，混合均勻，放入37℃，5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
5.對絕大多數(shù)細(xì)胞而言，1%以下之冷凍保護(hù)劑DMSO，不會對細(xì)胞之貼附或活化有不良影響，不需立刻由解凍細(xì)胞中去除，待第二天確定細(xì)胞生長或貼附良好后再去除即可。惟對極少數(shù)因?qū)MSO敏感或會造成細(xì)胞分化之細(xì)胞，需立即去除DMSO者，則可將解凍后之細(xì)胞懸浮液放入5-10 ml培養(yǎng)基中，離心300 xg(約1000 rpm)，5分鐘，小心移去上清液，加入適量新鮮培養(yǎng)基，將細(xì)胞均勻混合后，轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶中，再放入37℃，5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
