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人結(jié)腸癌細(xì)胞株前期需要準(zhǔn)備

原載自:www.niangtai.cn[行情動態(tài)]  2018-05-10  瀏覽次數(shù):1607

  人結(jié)腸癌細(xì)胞株的復(fù)蘇,遵守慢凍快融的原則。先將水浴鍋調(diào)至37-37.5度,取出凍存的細(xì)胞迅速放入后將細(xì)胞面浸至水面以下不斷搖動至融化。在無菌臺內(nèi)將*培養(yǎng)基加入50ml的小培養(yǎng)瓶內(nèi),約5ml左右,然后用無菌吸管從凍存管內(nèi)取出細(xì)胞,置培養(yǎng)并內(nèi)輕輕搖晃,使細(xì)胞均勻后置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。
  人結(jié)腸癌細(xì)胞株前期需要準(zhǔn)備:
  1.構(gòu)建好的外源基因載體
  2.待轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系(1×106個細(xì)胞,可傳代,倍增時間小于48小時)以及細(xì)胞培養(yǎng)條件的說明
  3.若需要檢測靶基因的表達(dá)變化,請?zhí)峁┫鄳?yīng)抗體
  收到人結(jié)腸癌細(xì)胞株后,取出培養(yǎng)瓶在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況。
 ?。ㄒ唬┤绻?xì)胞未長滿,用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內(nèi),嚴(yán)格無菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶,吸出培養(yǎng)液,僅留下10ml培養(yǎng)液在瓶內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)。
  (二)如果細(xì)胞已長滿,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下:
  1. 棄去培養(yǎng)液,用PBS(不含鈣,鎂離子)洗1-2次。
  2. 加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,倒轉(zhuǎn)放于37度培養(yǎng)箱1-3分鐘預(yù)熱,然后又將培養(yǎng)瓶倒轉(zhuǎn)大約30秒后,在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓分散,輕敲幾下培養(yǎng)培養(yǎng)瓶,細(xì)胞隨即脫落下來。
  3. 加入6-8ml*培養(yǎng)基,吸出,分到新的培養(yǎng)瓶中。一傳二。
  人結(jié)腸癌細(xì)胞株實驗要點及說明:
  1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
  2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為玻璃制造,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
  3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
  4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率;
  5.如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

 

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