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ATCC細(xì)胞的復(fù)蘇事項(xiàng)可要看好了!
原載自:www.niangtai.cn[行情動(dòng)態(tài)] 2019-03-07 瀏覽次數(shù):1255
ATCC細(xì)胞的復(fù)蘇事項(xiàng)可要看好了!
ATCC細(xì)胞復(fù)蘇的原則:
在實(shí)際操作中,凍存細(xì)胞要進(jìn)行復(fù)蘇,再培養(yǎng)傳代。復(fù)蘇細(xì)胞一般采用快速融化法。以保證細(xì)胞外結(jié)晶快速融化,以避免慢速融化水分滲入細(xì)胞內(nèi),再次形成胞內(nèi)結(jié)晶損傷細(xì)胞。
ATCC細(xì)胞的復(fù)蘇事項(xiàng):
1.仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書,了解細(xì)胞相關(guān)信息,如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例,配置相應(yīng)的*培養(yǎng)基,確保細(xì)胞培養(yǎng)條件與說明書一致。若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題,應(yīng)自行承擔(dān)。每株細(xì)胞2支凍存管復(fù)蘇時(shí)建議先只復(fù)蘇一支,若復(fù)蘇出現(xiàn)問題請(qǐng)及時(shí)與廠家取得聯(lián)系。
2.取出凍存管,浸入37溫水浴中,并不時(shí)搖動(dòng)令其盡快融化,注意管口不要沒入水面以下,以免造成污染。
3.從37水浴中取出凍存管,用75%酒精擦拭凍存管表面,放入超凈臺(tái)內(nèi)。吸出細(xì)胞懸液,轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),補(bǔ)加6-8mL培養(yǎng)液,37溫箱靜置培養(yǎng),隔天換新鮮培養(yǎng)液,以去除DMSO,或者復(fù)蘇當(dāng)時(shí)離心去除DMSO,并在顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)和密度;對(duì)于貼壁展開較慢的細(xì)胞,建議復(fù)蘇當(dāng)時(shí)去除DMSO,待細(xì)胞貼壁展開后再換液(原代細(xì)胞:細(xì)胞懸液離心后觀察管底沉淀初步判斷細(xì)胞量,后行臺(tái)盼藍(lán)染色以確定細(xì)胞存活率;接種后隔天觀察細(xì)胞貼壁量,以判定細(xì)胞貼壁率)。
4.貼壁細(xì)胞
過夜培養(yǎng)后多數(shù)細(xì)胞會(huì)重新貼壁,待匯合度80%左右時(shí)正常傳代。若細(xì)胞仍不能貼壁,請(qǐng)用臺(tái)盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力。如臺(tái)盼藍(lán)染色證實(shí)細(xì)胞活力正常則1000rpm離心3-5min收集細(xì)胞,用新鮮培養(yǎng)基重懸后移回培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)重新貼壁培養(yǎng)。
5.懸浮細(xì)胞
過夜培養(yǎng)后多數(shù)細(xì)胞會(huì)逐漸恢復(fù)活力,有光澤、飽滿。若細(xì)胞光澤暗淡,用臺(tái)盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力。
6.建議在收到細(xì)胞后每天各拍幾張細(xì)胞照片,記錄細(xì)胞狀態(tài),便于菌種的查詢。