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ATCC細(xì)胞傳代時如何挽救污染的細(xì)胞?

原載自:niangtai.cn[行情動態(tài)]  2025-05-14  瀏覽次數(shù):151

  在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,細(xì)胞污染是一個常見的問題,尤其是細(xì)菌、真菌和支原體污染。這些污染不僅會影響細(xì)胞的生長和實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性,還可能導(dǎo)致細(xì)胞死亡。ATCC細(xì)胞在傳代過程中,細(xì)胞污染仍然是一個需要特別關(guān)注的問題。
  一、識別污染的早期跡象
  在細(xì)胞傳代前,識別污染的早期跡象至關(guān)重要。常見的污染跡象包括:
  細(xì)菌污染:培養(yǎng)基變渾濁,細(xì)胞周圍出現(xiàn)小顆粒,培養(yǎng)基pH值變化(通常變酸)。
  真菌污染:培養(yǎng)基表面出現(xiàn)絲狀或絨毛狀物質(zhì),細(xì)胞形態(tài)異常。
  支原體污染:細(xì)胞生長緩慢,培養(yǎng)基無明顯變化,但細(xì)胞形態(tài)可能異常,如細(xì)胞聚集或變圓。
  二、挽救污染細(xì)胞的步驟
  1.確認(rèn)污染類型
  在采取任何挽救措施之前,首先需要確認(rèn)污染的類型。可以使用顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài),或通過特定的檢測方法(如PCR、熒光染色等)來確定污染的具體類型。這一步驟對于選擇合適的挽救方法至關(guān)重要。
  2.選擇合適的抗生素或抗真菌劑
  根據(jù)污染類型,選擇合適的抗生素或抗真菌劑。例如:
  細(xì)菌污染:可以使用廣譜抗生素,如青霉素/鏈霉素或慶大霉素。
  真菌污染:可以使用抗真菌劑,如兩性霉素B或制霉菌素。
  支原體污染:可以使用支原體專用抗生素,如泰樂菌素或四環(huán)素。
  3.逐步處理污染
  更換培養(yǎng)基:首先將受污染的培養(yǎng)基全移除,用無菌的PBS(磷酸鹽緩沖液)輕輕沖洗細(xì)胞,去除表面的污染物。
  添加抗生素或抗真菌劑:將含有適當(dāng)濃度抗生素或抗真菌劑的新鮮培養(yǎng)基加入培養(yǎng)瓶中,輕輕搖晃培養(yǎng)瓶,使細(xì)胞均勻分布。
  觀察細(xì)胞反應(yīng):將處理后的細(xì)胞放入培養(yǎng)箱中,定期觀察細(xì)胞的生長情況和污染的清除情況。通常需要連續(xù)處理3-5天,每天更換含有抗生素或抗真菌劑的培養(yǎng)基。
  4.評估處理效果
  在處理過程中,定期通過顯微鏡觀察細(xì)胞的形態(tài)和生長情況。如果污染得到控制,細(xì)胞形態(tài)恢復(fù)正常,可以逐漸減少抗生素或抗真菌劑的濃度,直至全去除。如果污染未能得到有效控制,可能需要考慮丟棄受污染的細(xì)胞,重新開始培養(yǎng)。
  三、預(yù)防污染的措施
  1.無菌操作
  在細(xì)胞傳代過程中,嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作規(guī)程是預(yù)防污染的關(guān)鍵。所有操作應(yīng)在超凈工作臺內(nèi)進(jìn)行,使用無菌的培養(yǎng)基和試劑,避免交叉污染。
  2.定期更換培養(yǎng)基
  定期更換培養(yǎng)基可以減少細(xì)菌和真菌的滋生。根據(jù)細(xì)胞的生長情況,通常每2-3天更換一次培養(yǎng)基。
  3.定期檢測
  定期對細(xì)胞進(jìn)行污染檢測,尤其是在傳代和凍存前后??墒褂蒙虡I(yè)化的支原體檢測試劑盒或PCR方法檢測支原體污染,使用顯微鏡觀察細(xì)菌和真菌污染。
  在ATCC細(xì)胞傳代時,挽救污染的細(xì)胞需要及時識別污染類型,并選擇合適的抗生素或抗真菌劑進(jìn)行處理。通過逐步更換培養(yǎng)基和觀察細(xì)胞反應(yīng),可以有效控制污染,恢復(fù)細(xì)胞的正常生長。同時,嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作規(guī)程和定期檢測是預(yù)防細(xì)胞污染的重要措施。在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,及時發(fā)現(xiàn)和處理污染問題,可以很大程度地減少對實驗結(jié)果的影響,確保細(xì)胞培養(yǎng)的成功和實驗數(shù)據(jù)的可靠性。

 

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