體外培養(yǎng)人結(jié)腸癌細胞株SW 620和 LOVO ,加入終濃度分別為 20 ～100μmol/L 的人參皂苷 Rh2。采用 MTT法測定藥物對細胞的的增殖抑制率 ( IR ) ,并計算半數(shù)抑制濃度 ( IC50) 。倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)。結(jié)果:人參皂苷 Rh2作用 SW 620和 LOVO  24 小時 IC50分別為 36μmol/ l和 40μmol/L;

　　人結(jié)腸癌細胞株實驗方法

　　1.3.  1　細胞增殖抑制實驗 　收集對數(shù)生長期的SW 620和 LOVO 細胞 , 以 1  ×105 /L 密度接種于 96孔培養(yǎng)板中,每孔 100μl,待細胞貼壁后加入終濃度為 20、30、40、50、60、70、80、100 mol的 Rh2,每個濃度設平行孔 4個 ,于37℃, 5% CO培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng) 24、48和72小時,每孔加入  5mg/mL的MTT20  L ,繼續(xù)培養(yǎng) 4 小時后 , 離心棄上清 ,加入150 L DM SO溶解 ,酶標儀 490nm 處檢測 OD 值 ,計算藥物的體外生長抑制率 ( IR )  IR  =  ( 1 - 給藥孔平均值 /對照孔平均值) 所對應的藥物濃度 (IC50  ) 。×100% ,計算 50%抑制率時所對應的藥物濃度 (IC50  ) 。

　　1. 3. 2　人結(jié)腸癌細胞株細胞形態(tài)學觀察　上述細胞在加入 MTT之前 ,倒置顯微鏡照相 ,記錄細胞形態(tài)學變化。

　　1. 4　統(tǒng)計學方法 　采用 SPSS13.  0 進行統(tǒng)計學分析 ,所有數(shù)據(jù)用  x ±s  表示,采用 t檢驗

　　2  人結(jié)腸癌細胞株結(jié)果

　　2.  1　人參皂苷 Rh2 對人結(jié)腸癌細胞株SW 620 和LOVO 生長的抑制作用　不同濃度 Rh2作用于細胞后不同時間,細胞毒作用呈明顯的時間和劑量依賴性, 見圖 1 ～5。Rh2 對SW 620細胞的IC50為36μmol/L ,而對 LOVO細胞的IC50為40μmol/L作用時間均為 24小時。

　　2. 2　細胞形態(tài)觀察　加藥組細胞體積變小、變形出現(xiàn)皺縮、變圓、脫落現(xiàn)象,細胞核固縮凝塊,見圖 6～7。

　　顯微鏡觀察人結(jié)腸癌細胞株 ,藥物作用后細胞出現(xiàn)明顯的凋亡形態(tài)。結(jié)論:人參皂苷 Rh2對 SW 620和 LOVO 細胞的生長具有抑制作用 ,且呈時間劑量依賴性。

　　腸癌是人類高發(fā)的消化系統(tǒng)惡性疾病 ,在惡性腫瘤發(fā)病率中排第 4 位 ,轉(zhuǎn)移和復發(fā)是大腸癌患者死亡的主要原因之一。目前臨床以手術(shù)治療并輔以術(shù)后放、化療為主要治療手段 ,但對晚期腸癌效果并不顯著。人參皂苷是從中藥人參中提取的具有抗癌作用的主要活性成分 , 以往的人結(jié)腸癌細胞株研究表明其能誘導細胞分化和凋亡而發(fā)揮抗腫瘤作用。國內(nèi)外文獻先后報道人參皂苷 Rh2 對多種腫瘤細胞如人肝癌細胞SK2HEP21、乳腺癌細胞及白血病細胞 HL60等具有抑制增殖和誘導凋亡作用。本實驗旨在研究人參皂苷 Rh2 對人人結(jié)腸癌細胞株增殖的抑制作用。

　　人參皂苷 Rh2 作為抗腫瘤作用非常顯著的中藥單體 ,可以通過降低細胞內(nèi) Ca2+濃度抑制 PKC α的轉(zhuǎn)位和激活 , 進一步抑制細胞 內(nèi)PKCα蛋白的表達 ,zui終阻礙 PKCα介導的增殖信號傳導過程      ,抑制腫瘤細胞增殖 , 同時抑制端粒酶活性 ,使腫瘤細胞的端粒長度不能維持而進入衰老并zui終死亡[2 ]  。Rh2可通過線粒體途徑誘導細胞凋亡[ 3 ] ,且其作用后使 DNA 含量較多的 S期細胞數(shù)量減少 , 而 DNA 含量較少的 G1 期細胞數(shù)量增多[4 ] ,進一步發(fā)揮阻滯細胞周期的作用。同時 Rh2是特異性抑制 Pgp 功能的逆轉(zhuǎn)劑[ 5 ],一定程度提高腫瘤對多種化療藥物的敏感性 ,減少化療藥物的臨床用藥劑量和毒副作用[ 6, 7 ]  。我們研究發(fā)現(xiàn) ,人參皂苷 Rh2單體對人結(jié)腸癌細胞株株 SW 062 和 LOVO 的生長有抑制作用 ,且與時間和濃度呈依賴性。同時, 還發(fā)現(xiàn) Rh2有體外誘導細胞凋亡的作用 ,顯微鏡下觀察細胞出現(xiàn)濃縮、變圓、脫落等細胞凋亡形態(tài)學改變。本研究結(jié)果表明,人參皂苷 Rh2單體有抑制人結(jié)腸癌細胞株增殖和誘導其凋亡的作用 ,有潛在治療結(jié)腸癌的應用價值 ,但其具體機制尚有待于進一步研究。

上一篇 : 科佰金秋校園行，走進南京醫(yī)科大學    下一篇 :  中國上海細胞庫如何保證試劑不受污染和不變質(zhì)

>> 返回首頁